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微生態(tài)制劑對水產(chǎn)動物的生物活性研究
?。ü枮I中科生物工程有限公司 趙前)
摘要:為測定微生態(tài)制劑“高免肽”對水產(chǎn)動物抗病、促生長功效以及生產(chǎn)應用價值。首選藥敏試驗結果表明,微生態(tài)制劑“高免肽”對大腸桿菌K99、金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌最小抑菌菌濃度分別為0.78、3.12 和6.25 μg/mL。選擇大黃魚、真鯛、白鰱、草魚、花鰱魚和青蝦為實驗動物,在基礎日糧中按比例0.1%添加高免肽。監(jiān)測實驗魚蝦成活率、日增重、餌料投入比等生產(chǎn)性能比較指標。結果顯示,高免肽對實驗魚蝦成活率平均提高10%以上,青蝦養(yǎng)殖效果顯著。
關鍵詞:微生態(tài)、高免肽、水產(chǎn)動物、生物活性、生產(chǎn)性能
高免肽是由酵母細胞壁、生物多糖、生物抗菌肽、生物堿、苷類、蒽醌類及其還原衍生物和多種活性肽組成,具有提高免疫力、提高消化率、殺滅細菌真菌和原蟲、抵制病毒侵擾等作用,是生物提高非特異性免疫的不可缺少的重要組成成分。與抗生素相比,具有高效、無耐藥性、無污染、無毒副作用等優(yōu)點,符合綠色環(huán)保飼料的要求,是理想的抗生素替代品。高免肽具有活性高、分子量小、熱穩(wěn)定性好、水溶性好和生物利用度高等特點。實驗通過在飼料中添加高免肽,比較對大黃魚、真鯛、白鰱、草魚、花鰱魚和青蝦的日平均增重、發(fā)病率、死亡率、餌料系數(shù)等生產(chǎn)性能影響,為高免肽在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應用提供理論依據(jù)。
1 材料、方法、時間與地點
1.1 實驗材料
試驗用高免肽由哈爾濱中科生物工程有限公司提供,批號黑飼添字(2009)251015,陰涼、干燥處貯藏。
實驗用菌株:大腸桿菌K99、金黃色葡萄球菌CowanⅠ和枯草芽孢桿菌均由國家獸用生物制品工程技術研究中心惠贈。
1.2 時間和地點
試驗地點:江蘇省鹽城市射陽縣黃沙港某養(yǎng)殖場。
試驗時間:2011年3月25日-2011年4月24日。
1.3 高免肽最小抑菌濃度的測定
采用微量稀釋法進行測定。把處于對數(shù)生長期OD600≈0.5(細菌計數(shù)約10^6)的指示菌用LB 培養(yǎng)液稀釋到OD600≈0.05,分別接種到96 孔細胞培養(yǎng)板上,每孔90 μL。將高免肽用pH 值6.0 的0.1 mol/LPBS 倍比稀釋。各取10 μL 分別加入培養(yǎng)孔中,混勻,每組重復3 個孔。設加LB 培養(yǎng)液為陰性對照,接種細菌的為陽性對照。置37 ℃培養(yǎng)箱孵育12 h后取出,用自動酶標儀測量培養(yǎng)液的OD600值,將完全抑制菌體生長的最低蛋白濃度確定為最小抑菌菌濃度(MIC)。
1.4 實驗動物的選擇與養(yǎng)殖
大黃魚、真鯛采用海水網(wǎng)箱養(yǎng)殖,全冰鮮飼料喂養(yǎng)。實驗組按每噸飼料添加高免肽1kg,飼養(yǎng)30 d,每天抽樣檢查。對照組飼喂不添加任何添加物的冰鮮飼料。
白鰱、草魚、花鰱魚采用池塘養(yǎng)殖方式,水深0.8~1.0 m,每667 m2 投入魚苗10 萬尾,基礎餌料為黃豆?jié){,實驗組按每噸飼料添加高免肽1kg,飼養(yǎng)25 d,每天抽樣檢查。對照組飼喂不添加任何藥物。
青蝦苗由長江直接捕撈的抱仔青蝦所繁育的蝦苗(長江蝦苗),每池平均放養(yǎng)規(guī)格7 000 尾/kg,每口池放養(yǎng)數(shù)量約6 萬尾,重量為8.6 kg。每日2 次喂料,基礎飼料為:豆粉、魚粉、皮糠、次粉、貝殼粉、礦物質、螺旋藻混合物。實驗組添加抗菌肽,按每噸飼料添加抗菌肽1kg。對照組飼喂不添加任何添加物的基礎飼料。
1.5 飼養(yǎng)管理
堅持每天2 次巡池,檢查實驗魚蝦攝食情況,及時調整日投餌量,嚴格檢查排水過濾設施是否破損,及時撈出殘餌雜物、多余水草,捕捉蛙、蛇等敵害生物。保證微流水的暢通、有充足的氧氣。定期使用生石灰進行全池潑灑消毒,生石灰用量為每口池
每次7.5 kg。
1.6 生產(chǎn)性能指標測定
每天采集數(shù)據(jù)至實驗結束,統(tǒng)計成活率、畝平均產(chǎn)量、平均個體重,計算餌料報酬等,并對發(fā)病率進行λ?卡方顯著性分析。ndm
2 結果
2.1 高免肽的最小抑菌濃度
通過微量稀釋法測得高免肽對大腸桿菌K99、金黃色葡萄球菌CowanⅠ和枯草芽孢桿菌的MIC 分別為0.78、3.12 和6.25 μg/mL。
2.2 大黃魚和真鯛養(yǎng)殖結果
飼養(yǎng)30 d,高免肽實驗組魚苗色澤鮮艷,大小均一。大黃魚實驗組的發(fā)病率為15.1%,對照組為26.3%,下降了11.2%。真鯛實驗組的發(fā)病率為17.6%,對照組為20.4%,下降了2.8%。可見高免肽顯著或極顯著降低大黃魚和真鯛的發(fā)病率(P<0.05)或(P<0.01)。實驗組大黃魚的日增重比對照組高0.14 g/d,真鯛的日增重比對照組高0.17 g/d,表現(xiàn)出較好的生產(chǎn)性能(表1)。
表1 高免肽對大黃魚、真鯛生產(chǎn)性能的影響
2.3 白鰱、草魚和花鰱魚養(yǎng)殖結果見表2.
表2 高免肽對白鰱、草魚和花鰱魚生產(chǎn)性能的影響
表2可以看出應用高免肽后,白鰱的成活率由40%提高至48.77%,草魚的成活率由16.8%提高至22.75%,花鰱魚的成活率由53.5%提高至68.01%。各實驗組和對照組比較分別提高了21.93%、35.42%和24.12%。λ?卡方分析表明,高免肽極顯著提高白鰱、草魚和花鰱魚的成活率(P<0.01)。草魚和花鰱的餌料系數(shù)分別降低18.7%和22.9%,每畝平均產(chǎn)量也明顯提高18.42%、19.98%、23.23%。
2.4 青蝦養(yǎng)殖結果見表3.
表2 高免肽對青蝦生產(chǎn)性能的影響
由表3可知,至實驗期結束,實驗組青蝦平均增長了2.3cm,對照組為1.4 cm。實驗組的平均增長是對照組的1.64 倍,比對照組提高了64.29%。實驗組平均產(chǎn)量101 kg/667 m2,對照組平均產(chǎn)量58.5 kg/畝,實驗組平均產(chǎn)量是對照組的1.73 倍,比對照組提高72.65%。
3 討論
高免肽是機體非特異性免疫不可缺少的重要組成部分,可以使細菌的細胞膜去極化或者形成“孔洞”,造成細胞內容物外流或者肽分子進入細胞內部與DNA、RNA 等形成靶向作用,進而殺死細菌。實驗結果顯示,體外高免肽對環(huán)境中常見的細菌大腸桿菌K99、金黃色葡萄球菌CowanⅠ和枯草芽孢桿菌敏感,最小抑菌菌濃度分別為0.78、3.12 和6.25 μg/mL。添加進飼料中高免肽仍具有顯著的抗菌活性,可以顯著提高魚苗的抗病能力。將高免肽用于魚苗培育階段,平均成活率可以提高10%以上。同時也發(fā)現(xiàn),高免肽也能明顯提高魚、蝦的生長速度及飼料利用效率,日增重平均增加,餌料報酬亦增加。
高免肽除具有抗菌、殺菌作用,對病毒、真菌、寄生蟲等其他病原微生物具有較強的抑制作用,還能與宿主體內某些陽離子蛋白、溶菌酶或抗生素協(xié)同作用,增強其抗菌效應。另外,高免肽生物學活性穩(wěn)定,在高離子強度和酸、堿環(huán)境中或100 ℃加熱10 min 時仍具有殺菌抑菌作用。實驗用高免肽可耐高溫(150 ℃以上),能耐受飼料制粒時的高溫。同時,高免肽是一種無毒、無害、綠色環(huán)保的產(chǎn)品,還具有不易出現(xiàn)耐藥性突變、分子量小、熱穩(wěn)定性好、水溶性好、作用迅速等特點。
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