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飼料粗蛋白測定

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發(fā)表于 2011-1-7 13:42:05 | 只看該作者 回帖獎勵 |倒序瀏覽 |閱讀模式
飼料—粗蛋白含量的測定—凱氏法  1 范圍
  本方法規(guī)定了飼料中粗蛋白含量的測定。
  本方法適用于配合飼料、濃縮飼料和單一飼料。
  2 引用標準
  GB601 化學試劑滴定分析用標準溶液的制備
  3 原理
  在催化劑作用下,用硫酸破壞有機物,使含氮物轉(zhuǎn)化成硫酸銨。加入強堿進行蒸餾使氨逸出,用硼酸吸收液吸收后,再用鹽酸標準溶液滴定。測出氮含量,將結(jié)果乘以換算系數(shù)6.25,計算出粗蛋白的含量。
  4 試劑
  分析中,除另有說明外,僅使用化學純的試劑和蒸餾水或與其純度相當?shù)乃?br />   4.1 硫酸, ρ約1.84g/mL
  4.2 混合催化劑
  稱取0.4g 硫酸銅(CuSO4·5H2O), 6g 硫酸鉀或硫酸鈉,磨碎混勻。
  4.3 氫氧化鈉溶液,400g/L
  4.4 硼酸溶液,20g/L
  4.5 混合指示劑溶液
  甲基紅乙醇溶液(1g/L),溴甲酚綠乙醇溶液(5g/L),兩溶液等體積混合,在陰涼處保存期為三個月。
  4.6 鹽酸標準溶液,c(HCl)=0.1mol/L、0.02mol/L
  4.6.1 配制c(HCl)=0.1mol/L
  移取8.3mL 鹽酸(分析純),于1000mL 容量瓶中,用水稀釋至刻度,混勻。此溶液為c(HCl)=0.1mol/L。
  4.6.2配制c(HCl)=0.02mol/L
  移取1.67mL 鹽酸(分析純),于1000mL 容量瓶中,用水稀釋至刻度,混勻。此溶液為c(HCl)=0.02mol/L。
  4.7 蔗糖,分析純
  4.8 硫酸銨,分析純,干燥
  4.9 硼酸吸收液
  于1000mL 硼酸水溶液(10g/L)中加入10mL 溴甲酚綠乙醇溶液(1g/L),7mL 甲基紅乙醇溶液(1g/L), 0.5mL 氫氧化鈉水溶液(40g/L),混勻,置陰涼處保存期為一個月(全自動程序用)。
        5 儀器設備
  5.1 實驗室用樣品粉碎機或研缽
  5.2 分樣篩,孔徑0.45mm(40 目)
  5.3 分析天平,感量0.0001g
  5.4 消煮爐或電爐
  5.5 滴定管,酸式,10、25mL
  5.6 凱氏燒瓶,250mL
  5.7 凱氏蒸餾裝置,常量直接蒸餾式或半微量水蒸氣蒸餾式
  5.8 錐形瓶,150、250mL
  5.9 容量瓶,100mL
  5.10 消煮管,250mL
  5.11 定氮儀,以凱氏原理制造的各類型半自動,全自動蛋白質(zhì)測定儀
  6 試樣制備
  選取具有代表性的試樣用四分法縮減至200g,粉碎后全部通過0.45mm(40 目篩),裝于密封容器中, 防止試樣成分的變化。
  7 操作步驟
  7.1 仲裁法
  7.1.1 試樣的消煮
  稱取試料0.5~1g(含氮量5~80mg)準確至0.0002g,放入凱氏燒瓶中,加入6.4g 混合催化劑,與試樣混合均勻,再加入12mL 硫酸和2 粒玻璃珠,將凱氏燒瓶置于電爐上加熱,開始小火,待樣品焦化,泡沫消失后,再加強火力(360~410℃)直至呈透明的藍綠色,然后再繼續(xù)加熱,至少2h。
  7.1.2 氨的蒸餾
  7.1.2.1 常量蒸餾法
  將試料消煮液冷卻,加入60~100mL 蒸餾水,搖勻,冷卻。將凱氏蒸餾裝置的冷凝管末端浸入裝有25mL 硼酸吸收液(20g/L)和2 滴混合指示劑溶液的錐形瓶內(nèi)。然后小心地向凱氏燒瓶中加入50mL 氫氧化鈉溶液(400g/L),輕輕搖動凱氏燒瓶,使液溶混勻后再加熱蒸餾,直至流出液體積為100mL。降下錐瓶,使冷凝管末端離開液面,繼續(xù)蒸餾1~2min,并用蒸餾水沖洗冷凝管末端,洗液均需流入錐形瓶內(nèi), 然后停止蒸餾。
7.1.2.2 半微量蒸餾法將試樣消煮液冷卻,加入20mL 蒸餾水,轉(zhuǎn)入100mL 容量瓶中,冷卻后用水稀釋至刻度,搖勻,做為試料分解液。將半微量蒸餾裝置的冷凝管末端浸入裝有20mL 硼酸吸收液(20g/L)和2 滴混合指示劑溶液的錐形瓶內(nèi)。蒸汽發(fā)生器的水中應加入甲基紅指示劑數(shù)滴,硫酸數(shù)滴,在蒸餾過程中保持此液為橙紅色, 否則需補加硫酸。準確移取10~20mL 試料分解液注入凱氏蒸餾裝置的反應室中,用少量蒸餾水沖洗進樣入口,塞好入口玻璃塞,再加10mL 氫氧化鈉溶液(400g/L),小心提起玻璃塞使之流入反應室,將玻璃塞
  塞好,且在入口處加水密封,防止漏氣。蒸餾4min,降下錐形瓶,使冷凝管末端離開吸收液面,再蒸餾1min,用蒸餾水沖洗冷凝管末端,洗液均流入錐形瓶內(nèi),然后停止蒸餾。
  注:7.1.2.1 和7.1.2.2 蒸餾法測定結(jié)果相近,可任選一種。
  7.1.2.3 蒸餾步驟的檢驗
  準確稱取0.2g 硫酸銨,代替試料,按7.1.2 或7.2.2 步驟進行操作,測得硫酸銨的質(zhì)量分數(shù)為21.19± 0.2%,否則應檢查加堿、蒸餾和滴定各步驟是否正確。
  7.1.3 滴定
  用7.1.2.1 或7.1.2.2 法蒸餾后的吸收液立即用鹽酸標準溶液(0.1mol/L 或0.02mol/L)滴定,溶液由藍綠色變成灰紅色為終點。
  7.2 推薦法
  7.2.1 試樣的消煮
  稱取0.5~1g 試料(含氮量5~80mg)準確至0.0002g,放入消化管中,加2 片消化片(儀器自備)或6.4g 混合催化劑,12mL 硫酸,于420℃下在消煮爐上消化1h。取出放涼后加入30mL 蒸餾水。
  7.2.2 氨的蒸餾
  采用全自動定氮儀時,按儀器本身常量程序進行測定。
  采用半自動定氮儀時,將帶消化液的管子插在蒸餾裝置上,以25mL 硼酸溶液(20g/L)為吸收液,加入2 滴混合指示劑溶液,凱氏蒸餾裝置的冷凝管末端要浸入裝有吸收液的錐形瓶內(nèi),然后向消煮管中加入50mL 氫氧化鈉溶液(400g/L)進行蒸餾。蒸餾時間以吸收液體積達到100mL 時為宜。降下錐形瓶,用蒸餾水沖洗冷凝管末端,洗液均需流入錐形瓶內(nèi)。
  7.2.3 滴定
  用標準鹽酸溶液(0.1mol/L)滴定吸收液,溶液由藍綠色變成灰紅色為終點。
  8 空白測定
  稱取0.5g 蔗糖,代替試料,按第7 章進行空白測定,消耗鹽酸標準溶液(0.1mol/L)的體積不得超過0.02mL。消耗鹽酸標準溶液(0.02mol/L)體積不得超過0.3mL。
  9 結(jié)果計算
  按下式計算粗蛋白質(zhì)的質(zhì)量分數(shù):
  粗蛋白質(zhì)(%)=0.0140×6.25×100V(V2-V1)C/MV/
  式中:V2——滴定試樣時所需標準酸溶液體積,mL;
  V1——滴定空白時所需標準酸溶液體積,mL;
  C ——鹽酸標準溶液濃度,mol/L;
  m ——試樣質(zhì)量,g;
  V ——試樣分解液總體積,mL;
  V′——試樣分解液蒸餾用體積,mL;
  0.0140——與1.00mL 鹽酸標準液[c(HCl)=1.000mol/L]相當?shù)?、以克表示的氮的質(zhì)量。
  6.25——氮換算成蛋白質(zhì)的平均系數(shù)。
      10 精密度
  每個試樣取兩個平行樣進行測定,以其算術平均值為結(jié)果。
  當粗蛋白質(zhì)含量在25%以上時,允許相對偏差為1%。
  當粗蛋白質(zhì)含量在10%~25%之間時,允許相對偏差為2%。
  當粗蛋白質(zhì)含量在10%以下時,允許相對偏差為3%。
  11 參考文獻
  GB/T 6432-94 飼料中粗蛋白測定方法
中國畜牧人網(wǎng)站微信公眾號
沙發(fā)
發(fā)表于 2011-1-8 08:57:05 | 只看該作者
這個方法有改進的地方,飼料廠要采用快速一些的方法。

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發(fā)表于 2011-1-23 23:27:49 | 只看該作者
很全面,很基礎
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