飼料粗蛋白測定

牧馬祁連

飼料—粗蛋白含量的測定—凱氏法　　1 范圍
　　本方法規(guī)定了飼料中粗蛋白含量的測定。
　　本方法適用于配合飼料、濃縮飼料和單一飼料。
　　2 引用標準
　　GB601 化學試劑滴定分析用標準溶液的制備
　　3 原理
　　在催化劑作用下，用硫酸破壞有機物，使含氮物轉(zhuǎn)化成硫酸銨。加入強堿進行蒸餾使氨逸出，用硼酸吸收液吸收后，再用鹽酸標準溶液滴定。測出氮含量，將結(jié)果乘以換算系數(shù)6.25，計算出粗蛋白的含量。
　　4 試劑
　　分析中，除另有說明外，僅使用化學純的試劑和蒸餾水或與其純度相當?shù)乃?br /> 　　4.1 硫酸， ρ約1.84g/mL
　　4.2 混合催化劑
　　稱取0.4g 硫酸銅(CuSO4·5H2O)， 6g 硫酸鉀或硫酸鈉，磨碎混勻。
　　4.3 氫氧化鈉溶液，400g/L
　　4.4 硼酸溶液，20g/L
　　4.5 混合指示劑溶液
　　甲基紅乙醇溶液(1g/L)，溴甲酚綠乙醇溶液(5g/L)，兩溶液等體積混合，在陰涼處保存期為三個月。
　　4.6 鹽酸標準溶液，c(HCl)=0.1mol/L、0.02mol/L
　　4.6.1 配制c(HCl)=0.1mol/L
　　移取8.3mL 鹽酸(分析純)，于1000mL 容量瓶中，用水稀釋至刻度，混勻。此溶液為c(HCl)=0.1mol/L。
　　4.6.2配制c(HCl)=0.02mol/L
　　移取1.67mL 鹽酸(分析純)，于1000mL 容量瓶中，用水稀釋至刻度，混勻。此溶液為c(HCl)=0.02mol/L。
　　4.7 蔗糖，分析純
　　4.8 硫酸銨，分析純，干燥
　　4.9 硼酸吸收液
　　于1000mL 硼酸水溶液(10g/L)中加入10mL 溴甲酚綠乙醇溶液(1g/L)，7mL 甲基紅乙醇溶液(1g/L)， 0.5mL 氫氧化鈉水溶液(40g/L)，混勻，置陰涼處保存期為一個月(全自動程序用)。
        5 儀器設備
　　5.1 實驗室用樣品粉碎機或研缽
　　5.2 分樣篩，孔徑0.45mm(40 目)
　　5.3 分析天平，感量0.0001g
　　5.4 消煮爐或電爐
　　5.5 滴定管，酸式，10、25mL
　　5.6 凱氏燒瓶，250mL
　　5.7 凱氏蒸餾裝置，常量直接蒸餾式或半微量水蒸氣蒸餾式
　　5.8 錐形瓶，150、250mL
　　5.9 容量瓶，100mL
　　5.10 消煮管，250mL
　　5.11 定氮儀，以凱氏原理制造的各類型半自動，全自動蛋白質(zhì)測定儀
　　6 試樣制備
　　選取具有代表性的試樣用四分法縮減至200g，粉碎后全部通過0.45mm(40 目篩)，裝于密封容器中， 防止試樣成分的變化。
　　7 操作步驟
　　7.1 仲裁法
　　7.1.1 試樣的消煮
　　稱取試料0.5～1g(含氮量5～80mg)準確至0.0002g，放入凱氏燒瓶中，加入6.4g 混合催化劑，與試樣混合均勻，再加入12mL 硫酸和2 粒玻璃珠，將凱氏燒瓶置于電爐上加熱，開始小火，待樣品焦化，泡沫消失后，再加強火力(360～410℃)直至呈透明的藍綠色，然后再繼續(xù)加熱，至少2h。
　　7.1.2 氨的蒸餾
　　7.1.2.1 常量蒸餾法
　　將試料消煮液冷卻，加入60～100mL 蒸餾水，搖勻，冷卻。將凱氏蒸餾裝置的冷凝管末端浸入裝有25mL 硼酸吸收液(20g/L)和2 滴混合指示劑溶液的錐形瓶內(nèi)。然后小心地向凱氏燒瓶中加入50mL 氫氧化鈉溶液(400g/L)，輕輕搖動凱氏燒瓶，使液溶混勻后再加熱蒸餾，直至流出液體積為100mL。降下錐瓶，使冷凝管末端離開液面，繼續(xù)蒸餾1～2min，并用蒸餾水沖洗冷凝管末端，洗液均需流入錐形瓶內(nèi)， 然后停止蒸餾。
7.1.2.2 半微量蒸餾法將試樣消煮液冷卻，加入20mL 蒸餾水，轉(zhuǎn)入100mL 容量瓶中，冷卻后用水稀釋至刻度，搖勻，做為試料分解液。將半微量蒸餾裝置的冷凝管末端浸入裝有20mL 硼酸吸收液(20g/L)和2 滴混合指示劑溶液的錐形瓶內(nèi)。蒸汽發(fā)生器的水中應加入甲基紅指示劑數(shù)滴，硫酸數(shù)滴，在蒸餾過程中保持此液為橙紅色， 否則需補加硫酸。準確移取10～20mL 試料分解液注入凱氏蒸餾裝置的反應室中，用少量蒸餾水沖洗進樣入口，塞好入口玻璃塞，再加10mL 氫氧化鈉溶液(400g/L)，小心提起玻璃塞使之流入反應室，將玻璃塞
　　塞好，且在入口處加水密封，防止漏氣。蒸餾4min，降下錐形瓶，使冷凝管末端離開吸收液面，再蒸餾1min，用蒸餾水沖洗冷凝管末端，洗液均流入錐形瓶內(nèi)，然后停止蒸餾。
　　注：7.1.2.1 和7.1.2.2 蒸餾法測定結(jié)果相近，可任選一種。
　　7.1.2.3 蒸餾步驟的檢驗
　　準確稱取0.2g 硫酸銨，代替試料，按7.1.2 或7.2.2 步驟進行操作，測得硫酸銨的質(zhì)量分數(shù)為21.19± 0.2%，否則應檢查加堿、蒸餾和滴定各步驟是否正確。
　　7.1.3 滴定
　　用7.1.2.1 或7.1.2.2 法蒸餾后的吸收液立即用鹽酸標準溶液(0.1mol/L 或0.02mol/L)滴定，溶液由藍綠色變成灰紅色為終點。
　　7.2 推薦法
　　7.2.1 試樣的消煮
　　稱取0.5～1g 試料(含氮量5～80mg)準確至0.0002g，放入消化管中，加2 片消化片(儀器自備)或6.4g 混合催化劑，12mL 硫酸，于420℃下在消煮爐上消化1h。取出放涼后加入30mL 蒸餾水。
　　7.2.2 氨的蒸餾
　　采用全自動定氮儀時，按儀器本身常量程序進行測定。
　　采用半自動定氮儀時，將帶消化液的管子插在蒸餾裝置上，以25mL 硼酸溶液(20g/L)為吸收液，加入2 滴混合指示劑溶液，凱氏蒸餾裝置的冷凝管末端要浸入裝有吸收液的錐形瓶內(nèi)，然后向消煮管中加入50mL 氫氧化鈉溶液(400g/L)進行蒸餾。蒸餾時間以吸收液體積達到100mL 時為宜。降下錐形瓶，用蒸餾水沖洗冷凝管末端，洗液均需流入錐形瓶內(nèi)。
　　7.2.3 滴定
　　用標準鹽酸溶液(0.1mol/L)滴定吸收液，溶液由藍綠色變成灰紅色為終點。
　　8 空白測定
　　稱取0.5g 蔗糖，代替試料，按第7 章進行空白測定，消耗鹽酸標準溶液(0.1mol/L)的體積不得超過0.02mL。消耗鹽酸標準溶液(0.02mol/L)體積不得超過0.3mL。
　　9 結(jié)果計算
　　按下式計算粗蛋白質(zhì)的質(zhì)量分數(shù)：
　　粗蛋白質(zhì)(%)=0.0140×6.25×100V(V2-V1)C/MV/
　　式中：V2——滴定試樣時所需標準酸溶液體積，mL;
　　V1——滴定空白時所需標準酸溶液體積，mL;
　　C ——鹽酸標準溶液濃度，mol/L;
　　m ——試樣質(zhì)量，g;
　　V ——試樣分解液總體積，mL;
　　V′——試樣分解液蒸餾用體積，mL;
　　0.0140——與1.00mL 鹽酸標準液[c(HCl)=1.000mol/L]相當?shù)?、以克表示的氮的質(zhì)量。
　　6.25——氮換算成蛋白質(zhì)的平均系數(shù)。
      10 精密度
　　每個試樣取兩個平行樣進行測定，以其算術平均值為結(jié)果。
　　當粗蛋白質(zhì)含量在25%以上時，允許相對偏差為1%。
　　當粗蛋白質(zhì)含量在10%～25%之間時，允許相對偏差為2%。
　　當粗蛋白質(zhì)含量在10%以下時，允許相對偏差為3%。
　　11 參考文獻
　　GB/T 6432-94 飼料中粗蛋白測定方法

dazhui

這個方法有改進的地方，飼料廠要采用快速一些的方法。

肥肚魚娘子

很全面，很基礎