哈獸研非洲豬瘟疫苗創(chuàng)制成功，具備大規(guī)模生產(chǎn)條件

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非洲豬瘟疫苗創(chuàng)制成功，向產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用邁出堅(jiān)實(shí)一步

中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所在 SCIENCE CHINA Life Sciences （《中國(guó)科學(xué)：生命科學(xué)》英文版）在線發(fā)表了題為” A seven-gene-deleted African swine fever virus is safe and effective as a live attenuated vaccine in pigs”的研究論文， 報(bào)道了一株人工缺失七個(gè)基因的非洲豬瘟弱毒活疫苗對(duì)家豬具有良好的安全性和有效性。

非洲豬瘟自2018年8月以來(lái)在全國(guó)范圍內(nèi)大規(guī)模爆發(fā)流行，使我國(guó)生豬出欄量減少40%，豬肉價(jià)格翻了一倍。依靠生物安全和撲殺措施控制非洲豬瘟難度極大，迫切需要研發(fā)有效疫苗。

基因缺失減毒活疫苗被認(rèn)為是非洲豬瘟疫苗最有希望的研發(fā)技術(shù)策略。研究人員以我國(guó)第一株非洲豬瘟病毒分離株P(guān)ig/HLJ/2018為骨架，利用同源重組技術(shù)構(gòu)建了一系列具有不同基因缺失的重組病毒（圖1）。通過(guò)在豬體內(nèi)進(jìn)行的系統(tǒng)的致病力、免疫原性和免疫保護(hù)性試驗(yàn)，遴選出一株具有7個(gè)基因缺失的病毒（HLJ/18-7GD）符合弱毒活疫苗安全性標(biāo)準(zhǔn)，可對(duì)非洲豬瘟強(qiáng)毒的致死性攻擊提供有效免疫保護(hù)（圖2）。

圖1：非洲豬瘟病毒不同基因缺失候選疫苗的構(gòu)建

目前，國(guó)際上已有一些非洲豬瘟基因缺失活疫苗的研究報(bào)道，這些疫苗接種豬后，均產(chǎn)生較高水平程度的病毒血癥，體內(nèi)持續(xù)帶毒時(shí)間長(zhǎng)，毒力返強(qiáng)風(fēng)險(xiǎn)高，安全性方面距離產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用存在很大差距。與此不同，HLJ/18-7GD即使最大劑量接種豬后，疫苗病毒不能在實(shí)質(zhì)器官?gòu)?fù)制，不產(chǎn)生病毒血癥，僅在部分淋巴結(jié)內(nèi)有限復(fù)制，兩周左右即被機(jī)體徹底清除，無(wú)法持續(xù)體內(nèi)連續(xù)傳代，不存在毒力返強(qiáng)風(fēng)險(xiǎn)。此外，該疫苗對(duì)懷孕母豬也具有良好的安全性，在懷孕的早期、中期及晚期注射疫苗都不能造成流產(chǎn)現(xiàn)象，免疫后分娩的仔豬健仔率與未免疫對(duì)照組沒(méi)有區(qū)別。

圖2：七基因缺失疫苗HLJ/18-7GD免疫對(duì)非洲豬瘟病毒強(qiáng)毒株致死性攻擊提供完全保護(hù)

該研究團(tuán)隊(duì)還證明，該疫苗株可在SPF豬原代骨髓細(xì)胞高效培養(yǎng)，一頭健康仔豬的原代細(xì)胞能制備出至少20萬(wàn)頭份的疫苗，完全具備大規(guī)模生產(chǎn)條件。該疫苗是目前最具實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用前景的疫苗，將為我國(guó)及有關(guān)國(guó)家非洲豬瘟疫情的有效防控提供重要技術(shù)手段。

該研究成果獲得國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃“生物安全關(guān)鍵技術(shù)”重點(diǎn)專項(xiàng)和黑龍江省應(yīng)用技術(shù)研究與開(kāi)發(fā)計(jì)劃的支持。

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2020版《非洲豬瘟診斷規(guī)范》

一、流行病學(xué)

（一）傳染源

感染非洲豬瘟病毒的家豬、野豬（包括病豬、康復(fù)豬和隱性感染豬）和鈍緣軟蜱等為主要傳染源。

（二）傳播途徑

主要通過(guò)接觸非洲豬瘟病毒感染豬或非洲豬瘟病毒污染物（餐廚廢棄物、飼料、飲水、圈舍、墊草、衣物、用具、車輛等）傳播，消化道和呼吸道是最主要的感染途徑；也可經(jīng)鈍緣軟蜱等媒介昆蟲(chóng)叮咬傳播。

（三）易感動(dòng)物

家豬和歐亞野豬高度易感，無(wú)明顯的品種、日齡和性別差異。疣豬和藪豬雖可感染，但不表現(xiàn)明顯臨床癥狀。

（四）潛伏期

因毒株、宿主和感染途徑的不同，潛伏期有所差異，一般為 5至19天，最長(zhǎng)可達(dá) 21天。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織《陸生動(dòng)物衛(wèi)生法典》將潛伏期定為15天。

（五）發(fā)病率和病死率

不同毒株致病性有所差異，強(qiáng)毒力毒株可導(dǎo)致感染豬在 12至14天內(nèi) 100% 死亡，中等毒力毒株造成的病死率一般為 30%至50% ，低毒力毒株僅引起少量豬死亡。

（六）季節(jié)性

該病季節(jié)性不明顯。

二、臨床表現(xiàn)

（一）最急性：無(wú)明顯臨床癥狀突然死亡。

（二）急性：體溫可高達(dá) 42℃ ，沉郁，厭食，耳、四肢、腹部皮膚有出血點(diǎn)，可視黏膜潮紅、發(fā)紺。眼、鼻有黏液膿性分泌物；嘔吐；便秘，糞便表面有血液和黏液覆蓋；腹瀉，糞便帶血。共濟(jì)失調(diào)或步態(tài)僵直，呼吸困難，病程延長(zhǎng)則出現(xiàn)其它神經(jīng)癥狀。妊娠母豬流產(chǎn)。病死率可達(dá)100% 。病程4至10天。

（三）亞急性：癥狀與急性相同，但病情較輕，病死率較低。體溫波動(dòng)無(wú)規(guī)律，一般高于 40.5℃ 。仔豬病死率較高。病程 5至30天。

（四）慢性：波狀熱，呼吸困難，濕咳。消瘦或發(fā)育遲緩，體弱，毛色暗淡。關(guān)節(jié)腫脹，皮膚潰瘍。死亡率低。病程2至15個(gè)月。

三、病理變化

典型的病理變化包括漿膜表面充血、出血，腎臟、肺臟表面有出血點(diǎn)，心內(nèi)膜和心外膜有大量出血點(diǎn)，胃、腸道黏膜彌漫性出血；膽囊、膀胱出血；肺臟腫大，切面流出泡沫性液體，氣管內(nèi)有血性泡沫樣粘液；脾臟腫大，易碎，呈暗紅色至黑色，表面有出血點(diǎn)，邊緣鈍圓，有時(shí)出現(xiàn)邊緣梗死。頜下淋巴結(jié)、腹腔淋巴結(jié)腫大，嚴(yán)重出血。

最急性型的個(gè)體可能不出現(xiàn)明顯的病理變化。

四、實(shí)驗(yàn)室鑒別診斷

非洲豬瘟臨床癥狀與古典豬瘟、高致病性豬藍(lán)耳病、豬丹毒等疫病相似，必須通過(guò)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)進(jìn)行鑒別診斷。

（一）樣品的采集、運(yùn)輸和保存（附件2）

（二）抗體檢測(cè)

抗體檢測(cè)可采用間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、阻斷酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)和間接熒光抗體試驗(yàn)等方法。

（三）病原學(xué)檢測(cè)

1.病原學(xué)快速檢測(cè)：可采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)或?qū)崟r(shí)熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)等方法。

2.病毒分離鑒定：可采用細(xì)胞培養(yǎng)等方法。從事非洲豬瘟病毒分離鑒定工作，必須經(jīng)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部批準(zhǔn)。

五、結(jié)果判定

（一）可疑病例

豬群符合下述流行病學(xué)、臨床癥狀、剖檢病變標(biāo)準(zhǔn)之一的，判定為可疑病例。

1.流行病學(xué)標(biāo)準(zhǔn)

（1）已經(jīng)按照程序規(guī)范免疫豬瘟、高致病性豬藍(lán)耳病等疫苗，但豬群發(fā)病率、病死率依然超出正常范圍；

（2）飼喂餐廚廢棄物的豬群，出現(xiàn)高發(fā)病率、高病死率；

（3）調(diào)入豬群、更換飼料、外來(lái)人員和車輛進(jìn)入豬場(chǎng)、畜主和飼養(yǎng)人員購(gòu)買生豬產(chǎn)品等可能風(fēng)險(xiǎn)事件發(fā)生后，15天內(nèi)出現(xiàn)高發(fā)病率、高死亡率；

（4）野外放養(yǎng)有可能接觸垃圾的豬出現(xiàn)發(fā)病或死亡。

符合上述4條之一的，判定為符合流行病學(xué)標(biāo)準(zhǔn)。

2.臨床癥狀標(biāo)準(zhǔn)

（1）發(fā)病率、病死率超出正常范圍或無(wú)前兆突然死亡；

（2）皮膚發(fā)紅或發(fā)紫；

（3）出現(xiàn)高熱或結(jié)膜炎癥狀；

（4）出現(xiàn)腹瀉或嘔吐癥狀；

（5）出現(xiàn)神經(jīng)癥狀。

符合第（1）條，且符合其他條之一的，判定為符合臨床癥狀標(biāo)準(zhǔn)。

3.剖檢病變標(biāo)準(zhǔn)

（1）脾臟異常腫大；

（2）脾臟有出血性梗死；

（3）下頜淋巴結(jié)出血；

（4）腹腔淋巴結(jié)出血。

符合上述任何一條的，判定為符合剖檢病變標(biāo)準(zhǔn)。

（二）疑似病例

對(duì)臨床可疑病例，經(jīng)縣級(jí)或地市級(jí)動(dòng)物疫病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)為陽(yáng)性的，判定為疑似病例。

（三）確診病例

對(duì)疑似病例，按有關(guān)要求經(jīng)省級(jí)動(dòng)物疫病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)實(shí)驗(yàn)室復(fù)核，結(jié)果為陽(yáng)性的，判定為確診病例。

來(lái)源：中國(guó)科學(xué)雜志、農(nóng)業(yè)農(nóng)村部