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發(fā)表于 2019-2-16 12:56:00 | 只看該作者 |只看大圖 回帖獎(jiǎng)勵(lì) |倒序?yàn)g覽 |閱讀模式
食品安全時(shí)代飼料中抗生素強(qiáng)有力的替代品,為何是它脫穎而出?


抗生素因?yàn)槭称钒踩凹?xì)菌耐藥性問題,其在飼料中的使用越來(lái)越受到限制。短中鏈脂肪酸(C1-C14)及其衍生物(脂肪酸鹽及脂肪酸甘油酯)具有廣泛的抑菌效果及其他營(yíng)養(yǎng)作用,是抗生素強(qiáng)有力的替代品。脂肪酸及其衍生物在抑菌機(jī)理和抑菌效果受到碳原子數(shù)量和衍生產(chǎn)物類型的影響,并且其在飼料中的應(yīng)用受到其它因素(飼料加工、胃腸道消化吸收、腸道內(nèi)pH等)的影響。短鏈脂肪酸(以丁酸為代表)的抑菌作用、營(yíng)養(yǎng)作用及其他功能性作用(如免疫、腸道屏障等)研究非常充分,但是其在飼料中的應(yīng)用卻受到了氣味、加工、動(dòng)物吸收等等方面的限制。隨即出現(xiàn)了脂肪酸鹽、包被脂肪酸及脂肪酸甘油酯。中鏈脂肪酸碳鏈長(zhǎng)度在8到14之間,其抑菌機(jī)理與短鏈脂肪酸完全不同。中鏈脂肪酸甘油酯是一種非離子表面活性劑,可以直接穿過(guò)細(xì)菌細(xì)胞膜,并成為細(xì)胞膜的一部分,從而改變細(xì)胞膜的穿透性;同時(shí)抑制細(xì)菌中脂肪酶(在細(xì)菌定植黏膜細(xì)胞表面過(guò)程中所必須的)的活性。中鏈脂肪酸及其衍生物抑菌效果高于短鏈和長(zhǎng)鏈鏈脂肪酸,其最小抑菌濃度比短鏈脂肪酸可低10倍。此外更有研究表明中鏈脂肪酸甘油酯對(duì)病毒有很強(qiáng)的抑制作用。本文綜述了短中鏈脂肪酸及其衍生物的抑菌機(jī)理和抑菌效果,以期為養(yǎng)殖業(yè)應(yīng)用此類產(chǎn)品提供使用依據(jù)。

文/圖 上海亙泰實(shí)業(yè)集團(tuán) 朱滔 黃小燕 王根虎
廣東美瑞科海洋生物科技有限公司 虞予

近年來(lái),脂肪酸及其衍生物的抑菌活性也一直受到人們的關(guān)注.已有研究表明,脂肪酸及其衍生物可抑制絲狀真菌以及酵母菌的生長(zhǎng),同時(shí)也可抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)繁殖。研究表明脂肪酸及其衍生物對(duì)常見致病細(xì)菌(鼠傷寒沙門菌、單核增生李斯特菌、副溶血性弧菌)存在抑制作用。脂肪酸根據(jù)碳原子的多少分為短鏈脂肪酸、中鏈脂肪酸和長(zhǎng)鏈脂肪酸。碳原子數(shù)為1-6的脂肪酸成為短鏈脂肪酸,也稱揮發(fā)性脂肪酸,主要包括乙酸、丙酸、異丁酸、丁酸、異戊酸、戊酸。碳原子數(shù)為8-14的脂肪酸成為中鏈脂肪酸,中鏈脂肪酸包括辛酸、癸酸、月桂酸、肉豆蔻酸。短鏈脂肪酸可以被腸道上皮細(xì)胞吸收,在腸道中既能作為能量被利用,也能調(diào)節(jié)腸道菌群平衡。并且短鏈脂肪酸對(duì)于維持大腸的正常功能和結(jié)腸上皮細(xì)胞的形態(tài)和功能具有重要作用。中鏈脂肪酸主要存在于椰子油和棕櫚油等植物油中,己酸至癸酸含量在椰子油約為15%。棕櫚油中的辛酸和月桂酸約占55-60%。另外反芻動(dòng)物乳中含量也高,牛油中含量低于6%。大量研究表明,中鏈脂肪酸可以降低動(dòng)物消化道和內(nèi)臟微生物數(shù)量以及動(dòng)物產(chǎn)品受微生物污染的機(jī)會(huì)。它不僅能夠滅活病菌,還能改變病原體的致病毒性。實(shí)驗(yàn)表明,中鏈脂肪酸有減少梭狀芽胞桿菌和沙門氏菌的毒力,抵抗疾病,減少腸道以及全身病毒的效果。因此本文綜述了短鏈和中鏈脂肪酸及其衍生物的抑菌機(jī)理、抑菌活性,為其在動(dòng)物日糧中的使用提供理論基礎(chǔ)。

1、短鏈脂肪酸

1.1、抑菌機(jī)理

游離脂肪酸的一般抗菌活性機(jī)理。其中一種廣為認(rèn)可的假設(shè)是短中鏈脂肪酸以它們未解離的形式擴(kuò)散到細(xì)菌細(xì)胞原生質(zhì)內(nèi),然后解離,從而導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)酸化(Sun等1998)。較低的細(xì)胞內(nèi)pH可導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)的酶失活(Viegas和Sa-Correia1991),和氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)抑制(Freese等,1973)。

圖1-1非電離有機(jī)酸抑菌殺菌機(jī)理

在偏酸(pH為3-4)的環(huán)境,非電離的有機(jī)酸可穿入大部分細(xì)菌胞膜,有機(jī)酸在胞內(nèi)電離產(chǎn)生氫離子,而導(dǎo)致胞內(nèi)pH偏低(Russell和Diez-Gonzalez,1998),影響到細(xì)菌內(nèi)生物大分子的功能。為了維持胞內(nèi)pH呈中性,細(xì)菌必需動(dòng)用能源ATP來(lái)運(yùn)送氫離子到胞外。但此耗能工作終將導(dǎo)致細(xì)菌用盡能源而死亡(Guilloteau等,2010)。而酸根離子則有可能影響到胞核內(nèi)的基因表達(dá),下調(diào)其毒性,如侵入腸膜細(xì)胞能力。比利時(shí)科學(xué)家VanImmerseel等(2006)已證明丁酸對(duì)沙門氏菌就具有下調(diào)其毒性基因表達(dá)的效果,而導(dǎo)致沙門氏菌在腸道內(nèi)的危害大為減弱。由于有機(jī)酸滅菌功能主要來(lái)自于非解離分子狀態(tài),而解離程度與環(huán)境pH值和其本身的解離常數(shù)(pKa),所以有機(jī)酸抑菌殺菌的效果受到環(huán)境酸堿度及其本身的電離特性(pKa)(表1)的影響。丁酸及丙酸的效率應(yīng)高于甲酸、乳酸和苯甲酸。有機(jī)酸的殺菌作用在偏酸(pH=4)環(huán)境較偏堿(pH=7)環(huán)境強(qiáng),在pH=4有機(jī)酸多以非電離結(jié)構(gòu)存在,因而易于殺滅有害細(xì)菌。

表1,有機(jī)酸在家禽消化道的結(jié)構(gòu)式與部位的酸堿度有直接關(guān)系


1.2、短鏈脂肪酸抑菌效果

表2列出丙酸及山梨酸在電離或非電離分子時(shí)對(duì)抑制幾種有害細(xì)菌生長(zhǎng)所需的最低濃度的比較。電離分子滅菌所需的濃度為非電離分子的11到350倍,因而失去了在飼料加工的實(shí)用性。由于有機(jī)酸必須在偏酸的環(huán)境才有較好的滅菌功能,那么在豬的消化道只有胃的pH接近有機(jī)酸最佳的滅菌功能。對(duì)飼料到達(dá)胃之前的滅菌功能不大。據(jù)有機(jī)酸的消化試驗(yàn)報(bào)告(Bolton和Dewar,1965),大部分(95-99%)乙酸、丙酸及丁酸都在到達(dá)小腸之前被吸收入體內(nèi)(表6),因而不能對(duì)小大腸提供顯著功能。有機(jī)酸在胃中作為酸化劑的功能也會(huì)因?yàn)轱暳吓浞街衅渌系闹泻湍芰Χ档停ū?)。即便是有機(jī)酸能過(guò)胃而到達(dá)小腸,其酸化或滅菌功能也會(huì)因腸道分泌大量的中和物(碳酸氫鈣或碳酸氫鈉)被大量削減。試驗(yàn)指出高劑量添加有機(jī)酸(1%)也不能顯著降低盲腸的pH值(表5)。這也說(shuō)明丁酸、丁酸鈉/鈣鹽或包被丁酸即便是能過(guò)胃達(dá)到小腸,其功能效率也不顯著。有機(jī)酸(如丁酸)應(yīng)與另一分子結(jié)合因而其滅菌功能不受環(huán)境pH的限制(即在酸堿環(huán)境下,均能有效滅菌)。

表2,非電離或電離有機(jī)酸對(duì)抑制有害細(xì)菌生長(zhǎng)的最低濃度


表3,不同有機(jī)酸在pH5.2抑制芽孢、大腸桿菌及乳酸菌的最低濃度比較


表4,常用飼料原料在酸性環(huán)境(如胃)的中和作用


表5,添加不同劑量的甲酸、丙酸或檸檬酸對(duì)41日齡肉雞盲腸pH的影響

GauthierR.,2006.AustralianVeterinaryPoultryAssociationConference

Defoirdt等(2006)報(bào)道不同濃度的短鏈脂肪酸例如甲酸、乙酸、丙酸、丁酸和戊酸(1,10和100mM)在pH6時(shí)對(duì)坎氏弧菌的生長(zhǎng)抑制的影響。他們進(jìn)一步指出,在濃度為100mM時(shí),所有的短鏈脂肪酸都顯示出對(duì)坎氏弧菌生長(zhǎng)100%抑制,然而在其他兩個(gè)濃度時(shí)無(wú)效果。根據(jù)上述調(diào)查結(jié)果,Wolin(1969)報(bào)道在pH6,10mM的短鏈揮發(fā)性脂肪酸部分抑制大腸桿菌的生長(zhǎng)。相似地,VanImmerseel等(2003)也報(bào)道,在同樣的pH條件下,100mM的短鏈脂肪酸完全抑制腸炎沙門氏菌。

Defoirdt等(2006)報(bào)道短鏈脂肪酸(甲酸、乙酸、丙酸、丁酸和戊酸)對(duì)坎氏弧菌的生長(zhǎng)抑制作用具有pH依賴性。他們指出pH5,生長(zhǎng)被完全抑制,然而在pH6時(shí),生長(zhǎng)抑制被推遲,在pH7無(wú)抑制效果。本研究結(jié)果與Wolin(1969),McHan和Shotts(1993)和VanImmerseel等(2003)研究在不同pH條件下短鏈脂肪酸對(duì)大腸桿菌和腸炎沙門氏菌生長(zhǎng)抑制效果的結(jié)果存在相關(guān)性。生長(zhǎng)抑制效果依賴pH的原因?qū)嶋H上是因?yàn)樵诘蚿H時(shí),占主導(dǎo)地位的未解離的脂肪酸能通過(guò)細(xì)胞膜(Sun等1998)。

1.3、短鏈脂肪酸在飼料中應(yīng)用缺陷

a、短鏈脂肪酸發(fā)揮作用需要已未解離形式存在,需要在胃腸道中維持偏酸性環(huán)境,但腸道中ph偏中性(見表6)。

b、短鏈脂肪酸在胃腸道前段就已經(jīng)作為能量物質(zhì)被吸收,吸收率很高,很難達(dá)到腸道后段發(fā)揮作用。因此短鏈脂肪酸在胃腸道前段發(fā)揮作用,而包被脂肪酸可以控制其釋放位點(diǎn),從而在腸道后段發(fā)揮作用,而這也是有害微生物聚集的位置。

c、短鏈脂肪酸具有異味,添加至飼料中影響適口性

d、短鏈脂肪酸具有腐蝕性,添加至飼料過(guò)程中容易腐蝕加工設(shè)備

2、短鏈脂肪酸鹽

短鏈脂肪酸具有很多的優(yōu)點(diǎn),因其具有游離性和揮發(fā)性的缺陷限制了其在飼料中的使用,飼料生產(chǎn)中將其制成相對(duì)穩(wěn)定的鈉鹽,因此脂肪酸鹽進(jìn)入了畜牧業(yè)人員的眼中。

脂肪酸鹽是一種常見的脂肪酸產(chǎn)品形式,但其惡臭氣味給加工者帶來(lái)麻煩,更重要的是此類產(chǎn)品把脂肪酸送達(dá)到腸道的能力十分有限,有學(xué)者報(bào)道脂肪酸鹽形式的脂肪酸過(guò)胃后,超過(guò)99%的脂肪酸在小腸前端被快速吸收(Bolton和Dewar,1965)(如表6)。

1)、大約40%的脂肪酸鹽在禽嗉囊被吸收;

2)、進(jìn)入胃中,在鹽酸的水解作用下,將脂肪酸鹽分解為游離脂肪酸和氯化物;

3)、游離脂肪酸在小腸前段被吸收,無(wú)法到達(dá)腸道

表6,有機(jī)酸鹽在家禽消化道濃度改變的測(cè)定


3、包被脂肪酸及脂肪酸鹽

3.1、使用包被脂肪酸的原因

A、脂肪酸在小腸中很容易被吸收,通過(guò)包被可以使脂肪酸到達(dá)后腸道,發(fā)揮殺菌功能;

B、脂肪酸鹽有特殊的脂臭味,是豬喜歡,人不喜歡,當(dāng)使用者對(duì)脂肪酸鹽氣味不適應(yīng)時(shí)采用包被產(chǎn)品;

C、防止產(chǎn)品受潮。

3.2、包被脂肪酸的材料

A、水溶性壁材包被:如糖漿、乳清粉、殼聚糖

B、脂溶性壁材包被:如棕櫚油硬脂、羥化油脂等

3.3、抑菌效果


注:VanImmerseel等(2004)采用的是包被短鏈脂肪酸(甲酸0.22%、乙酸0.24%、丙酸0.27%用的film-coatedmicrobeads包膜微球,丁酸0.15%用的是spray-cooledmicrocapsules噴霧冷卻微膠囊.),無(wú)菌小雞仔5、6日齡攻毒腸炎沙門氏菌5×103cfu,第8日齡盲腸采樣測(cè)定沙門氏菌含量。

3.4、缺陷

一些包被基質(zhì)遇水被分解掉,即在進(jìn)入動(dòng)物體內(nèi)或者剛到達(dá)消化道就已經(jīng)被變?yōu)橹舅?脂肪酸鹽;脂肪酸鹽在胃中被水解,無(wú)法達(dá)到腸道,起不到抑菌的作用。

由硬脂酸和棕櫚酸制成的膠囊,其消化率低(SminkW等,2008),仔豬沒有足夠的脂肪酶分解膠囊。脂肪酶僅在十二指腸發(fā)揮作用(小腸第一段)

氫化脂質(zhì)制成的膠囊的消化率(如棕櫚酸、硬脂酸和棕櫚酸/硬脂酸甘油酯制成的膠囊);熔點(diǎn),50-60°C。

4、短鏈脂肪酸甘油酯

為了克服脂肪酸、脂肪酸鹽及包被脂肪酸以上的難點(diǎn),更好地應(yīng)用脂肪酸,有專家將短鏈脂肪酸與甘油混合制備成短鏈脂肪酸甘油酯,生產(chǎn)應(yīng)用較多的是丁酸甘油酯。其特點(diǎn)如下:

A、短鏈脂肪酸經(jīng)過(guò)與甘油的共價(jià)結(jié)合,性質(zhì)更穩(wěn)定,不受高溫和pH影響,而且沒有原來(lái)的惡臭味道。

B、在腸道中被緩慢釋放,發(fā)揮對(duì)腸黏膜的功能性作用;

C、具有更強(qiáng)大的殺菌作用

D、全程維護(hù)消化道

4.1、抑菌機(jī)理
A、通過(guò)水脂兩親特性破壞有害菌細(xì)胞膜

B、通過(guò)水通道蛋白進(jìn)入細(xì)菌細(xì)胞

4.2、抑菌效果

短鏈脂肪酸及其甘油酯對(duì)一系列病原微生物都有抑制作用,包括包膜病毒、衣原體和細(xì)菌(Isaacs等,1995;Petschow等,1996;Bergsson等,1998;Bergsson等,1999)。

據(jù)報(bào)道,在腸道pH6-7時(shí)需要2.8%的純丁酸(28kg/t)殺死54沙門氏菌菌株,如果我們考慮到微膠囊丁酸鈉含24%的丁酸,則需要11.6%的包被丁酸鈉在腸道中起到抗沙門氏菌的作用(116kg/t),在pH7丁酸甘油酯的最小抑制沙門氏菌的濃度(同樣抑制大腸桿菌O157)為0.06-0.12%。

據(jù)報(bào)道,脂肪酸甘油一酯的抑菌效果極強(qiáng)如:幽門螺桿菌、淋病奈瑟菌、鏈球菌和復(fù)雜皰疹病毒等,是游離脂肪酸的10倍以上。其抑菌活性不像游離脂肪酸一樣依賴于pH,且極容易被微生物細(xì)胞吸收。

在體外培養(yǎng)基及不同pH(4.5/7)環(huán)境下,丁酸與丁酸甘油一酯對(duì)沙恩數(shù)據(jù)及梭狀腸炎菌的殺滅功能比較。

5、中鏈脂肪酸及其衍生物

5.1、抑菌機(jī)理

盡管脂肪酸甘油酯的抑菌機(jī)理還不是非常清楚,但是其中一種比較合理的假設(shè)就是,脂肪酸甘油酯,作為一種非離子表面活性劑(Mroz等,2006),穿過(guò)細(xì)菌細(xì)胞膜,并成為細(xì)胞膜的一部分,從而改變細(xì)胞膜的穿透性(Kollanoor等,2007),同時(shí)抑制其中脂肪酶的活性,而脂肪酶對(duì)于其在黏膜細(xì)胞表面定植是必須的(Isaacs等,1995;Bergsson等,1998,2002)。電鏡研究表明,脂肪酸甘油酯處理細(xì)菌時(shí),細(xì)菌膜的漿膜溶解,而對(duì)細(xì)胞壁的肽聚糖無(wú)影響。(Bergsson等,1998)。脂肪酸及其甘油酯(如月桂酸甘油酯)在低劑量時(shí)會(huì)影響細(xì)菌信號(hào)傳導(dǎo)、抑制毒性因子及耐藥性基因的表達(dá)(Projan等,1994;Ruzin和Novick,1998)。除了這些作用外,中鏈脂肪酸甘油酯的還可以激活溶菌酶,也在一定程度上抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)(Tsuchido等,1985)。

5.2、抑菌活性

中鏈脂肪酸甘油酯抑菌活性較其他脂肪酸和衍生物具有更強(qiáng)的抑菌活性。Wang和Johnson(1992)報(bào)道,脂肪酸的抗菌作用隨著鏈長(zhǎng)度的增加而降低,中鏈脂肪酸的抗菌作用比長(zhǎng)鏈脂肪酸更強(qiáng)。Isaacs等(1995)也指出含有8-12個(gè)碳的脂肪酸比長(zhǎng)鏈脂肪酸的抗病毒和抗菌效果更好。中鏈脂肪酸與長(zhǎng)鏈脂肪酸相比,疏水性較低且更易溶,其殺菌效果更好。中鏈脂肪酸對(duì)空腸彎曲菌的最小抑菌濃度(Hermans等,2010)比短鏈脂肪酸的最小抑菌濃度(VanDeum等,2008)低10倍以上。Boyen等(2008)年的研究結(jié)果類似,他發(fā)現(xiàn)中鏈脂肪酸(辛酸和癸酸)比短鏈脂肪酸(甲酸、乙酸、丙酸、丁酸)對(duì)54種鼠傷寒沙門氏菌的最小抑菌濃度低8倍,另外一些革蘭氏陰性菌和陽(yáng)性菌也有同樣的情況(Nakai和Siebert,2003)。VanImmerseel等(2006)更是指出,在對(duì)沙門氏菌的抑制效果上,所有脂肪酸中,中鏈脂肪酸可能是最有效果的。此外,許多研究表明辛酸、癸酸和月桂酸的脂肪酸酯比其脂肪酸形式更能抑制細(xì)菌(Kabara等,1972;Bergsson等,1998,1999,2002;Petschow等,1998,Sprong等,1999)。

脂肪酸單甘酯,甘油二酯,甘油三酯的最小抑菌圈濃度(Kabara等,1972)


己酸、辛酸、葵酸對(duì)空腸彎曲菌的最低抑菌活性在ph6時(shí)分別為0.25、0.5、0.5mM,在ph7時(shí)分別為4、4、4mM(Hermans等,2010)。研究證明辛酸、辛酸甘油酯和辛酸鹽對(duì)一系列細(xì)菌都有殺菌作用,包括大腸桿菌(Annamalai等,2004;Amalaradjou等,2006)、阪崎腸桿菌(Nair等,2004)和李斯特菌(Nair等,2005)。

Immanuel等(2011)研究了不同濃度辛酸和不同時(shí)間對(duì)副溶血性弧菌生長(zhǎng)的影響。此研究表明在辛酸在100mM濃度時(shí),5h就100%完全抑制病菌的生長(zhǎng)。研究證明辛酸、辛酸甘油酯和辛酸鹽對(duì)叉尾鮰愛德華菌、遲緩愛德華氏菌、鏈球菌和魯氏耶爾森菌的最小殺菌量分別為10、5和100mm,10、5和100mm,15、5和75mm(Kollanoor等,2007)。

6、短中鏈脂肪酸甘油酯復(fù)合物

7、抑菌功能總結(jié)和比較

1.短鏈脂肪酸(乙,丙,?。憾∷峋哂卸喙δ苌?,及抑制細(xì)菌生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì),但抑制范圍及有效度,及環(huán)境應(yīng)用限制因子(腐蝕性,惡臭,僅在酸性環(huán)境有效,水溶性太強(qiáng)極易在動(dòng)物消化道內(nèi)被吸收劑代謝)

2.丁酸鈉,包被丁酸鈉:有助消化道發(fā)育,但抑制細(xì)菌力弱,物化穩(wěn)定性弱(電子鍵)

3.丁酸甘油酯(一酯):抑制一般有害細(xì)菌力強(qiáng),也有助消化道發(fā)育,其物化穩(wěn)定性極強(qiáng)(共價(jià)鍵)

4.中鏈脂肪酸(C6,C8,C10,C12):有抑制細(xì)菌生長(zhǎng)功能

5.包被中鏈脂肪酸及甘油酯(一酯):強(qiáng)化其抑制細(xì)菌功能,但是目前包被的工藝尚不成熟(包被過(guò)渡或包被不夠)

6.短中鏈脂肪酸甘油酯(三酯,二酯,一酯):擴(kuò)大抑制有害病菌及病毒范圍及有效度

脂肪酸功能總結(jié)比較如表所示


結(jié)論


  抗生素問題是飼料和養(yǎng)殖行業(yè)現(xiàn)如今面臨的最大挑戰(zhàn)之一。雖然通過(guò)飼養(yǎng)管理措施的改進(jìn)和添加一些飼料添加劑(氧化鋅、益生菌)可以降低抗生素的使用,但是我們需要更加科學(xué)、準(zhǔn)確、有效的措施來(lái)替代抗生素。短中鏈脂肪酸及其衍生物特制產(chǎn)品是動(dòng)物機(jī)體正常代謝產(chǎn)物,殘留和耐藥風(fēng)險(xiǎn)很小。并且其在抑制革蘭氏陽(yáng)性菌和陰性菌時(shí)具有獨(dú)特優(yōu)勢(shì),脂肪酸單甘油酯在抑菌效果、抑菌機(jī)理、實(shí)際使用效果上都具有明顯的獨(dú)特優(yōu)勢(shì)。




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