微生物檢測中培養(yǎng)基的質(zhì)量控制措施！

IMCTT 2017-7-25 08:59

1206 來自: 食品實(shí)驗(yàn)室服務(wù)

簡介

培養(yǎng)基是液體、半固體或固體形式的，含天然或合成成分，用于保證微生物繁殖或保持其活力的物質(zhì)。

　　培養(yǎng)基是液體、半固體或固體形式的，含天然或合成成分，用于保證微生物繁殖或保持其活力的物質(zhì)。培養(yǎng)基的制備和使用是微生物實(shí)驗(yàn)室檢測工作的重要環(huán)節(jié)，培養(yǎng)基自身質(zhì)量的優(yōu)劣、保存是否得當(dāng)、配制使用是否正確等都直接影響到檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。本文對微生物實(shí)驗(yàn)室在培養(yǎng)基購置、貯存、制備、使用等方面應(yīng)采取的質(zhì)量控制措施進(jìn)行討論，談一些觀點(diǎn)和看法。希望有助于微生物檢測工作的同行們更好的開展工作。

　　1 培養(yǎng)基的購置與驗(yàn)收

　　1.1 購置

　　從培養(yǎng)基自身的質(zhì)量來看，不同生產(chǎn)廠家的產(chǎn)品，甚至同一廠家不同批號的產(chǎn)品都會存在差異。依據(jù)ISO/IEC17025《檢測和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室能力的通用要求》，對培養(yǎng)基的供應(yīng)企業(yè)進(jìn)行評價(jià)后選擇合格的供應(yīng)商，這是培養(yǎng)基購買過程中重要的步驟。應(yīng)選擇產(chǎn)品市場信譽(yù)度高、有質(zhì)量保證能力和服務(wù)保證能力的企業(yè)；企業(yè)是否通過了質(zhì)量管理體系的認(rèn)證是較為客觀的評價(jià)指標(biāo)。要求生產(chǎn)企業(yè)提供：培養(yǎng)基成分名稱及產(chǎn)品編號、批號、使用前的pH、儲藏信息和有效期、性能評價(jià)和所用測試菌株、技術(shù)數(shù)據(jù)清單、質(zhì)控證書以及必要的安全/危害數(shù)據(jù)等材料。

　　1.2 驗(yàn)收

　　購買的培養(yǎng)基到貨后，應(yīng)有專人做好接受和驗(yàn)收工作，應(yīng)仔細(xì)核對生產(chǎn)企業(yè)提供的資料、培養(yǎng)基名稱、規(guī)格數(shù)量、外觀特征、批號、保質(zhì)期是否符合要求。每批培養(yǎng)基到貨物后都應(yīng)對培養(yǎng)基的質(zhì)量進(jìn)行檢測，滿足檢測方法規(guī)定的要求后方可投入使用。

　　2 培養(yǎng)基的儲存

　　干粉培養(yǎng)基應(yīng)保存在陰涼干燥處，要避免陽光直射；未開瓶的培養(yǎng)基保存期限應(yīng)按照生產(chǎn)廠家提供的信息執(zhí)行，開瓶后的干粉培養(yǎng)基易吸濕，應(yīng)注意防潮并盡快用完。應(yīng)定期對儲存中的培養(yǎng)基進(jìn)行常規(guī)檢查，如容器密閉性復(fù)查、首次開封日期、內(nèi)容物的感官檢查，如果培養(yǎng)基發(fā)生結(jié)塊、顏色異常和其他變質(zhì)跡象就不能再使用。

　　3 培養(yǎng)基的制備

　　3.1 培養(yǎng)基用水

　　培養(yǎng)基制備用水應(yīng)使用電阻率不小于30萬Ωcm的蒸餾水或與其同質(zhì)的水，最好不使用離子交換器生產(chǎn)的去離子水。

　　3.2 稱量

　　稱量時(shí)要用專用的角匙，避免交叉污染而影響檢驗(yàn)結(jié)果；干粉培養(yǎng)基易吸潮，如有條件，盡量在濕度較低的房間稱取培養(yǎng)基。

　　3.3 復(fù)水

　　復(fù)水時(shí)不得用銅鍋或鐵鍋，以防有離子混入培養(yǎng)基中，影響微生物的生長；容器的大小需大于復(fù)水后培養(yǎng)基總體積的2倍以上，避免在加熱溶解過程中，培養(yǎng)基溢出；含有瓊脂粉的培養(yǎng)基，在加熱溶解之前可以浸泡數(shù)分鐘；加熱培養(yǎng)基時(shí)一定要進(jìn)行攪拌，特別是瓊脂類培養(yǎng)基。為避免燒焦和沸騰溢出，對于少量的培養(yǎng)基最好使用沸水浴進(jìn)行加熱。燒糊的培養(yǎng)基營養(yǎng)物質(zhì)被破壞，并可產(chǎn)生有毒物質(zhì)，如發(fā)現(xiàn)焦化，或未溶解均勻前培養(yǎng)基有溢出，該培養(yǎng)基即不能使用，應(yīng)重新制備。

　　3.4 滅菌

　　一般培養(yǎng)基采用濕熱滅菌，即高壓蒸汽滅菌，通常是121℃ 15 min，含糖或特殊培養(yǎng)基，按照國家標(biāo)準(zhǔn)或生產(chǎn)商提供的說明滅菌。已配制好的培養(yǎng)基必須立即滅菌，避免微生物生長繁殖而消耗養(yǎng)分，改變培養(yǎng)基的酸堿度。高溫可破壞培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分，還會使瓊脂的凝膠強(qiáng)度下降，因此必須嚴(yán)格控制滅菌溫度和時(shí)間，并且不可重復(fù)滅菌。高壓蒸汽滅菌鍋的壓力表等要定期進(jìn)行檢定，并定期采用生物指示菌法或化學(xué)變色紙片對滅菌效果進(jìn)行驗(yàn)證。

　　3.5 pH測定

　　微生物必須在適宜的pH范圍內(nèi)才能正常生長繁殖或體現(xiàn)其生物特性。培養(yǎng)基配方要求的pH為滅菌或消毒后的pH 值，即培養(yǎng)基使用前的pH，并應(yīng)在25℃溫度下采用精密酸度計(jì)進(jìn)行測量，固體瓊脂培養(yǎng)基應(yīng)以特殊的膠體表面測量電極進(jìn)行測量。使用過程中，如果需要調(diào)整培養(yǎng)基的pH，應(yīng)用1mol/L Na0H或 lmol/L HCL調(diào)整，注意不可反復(fù)調(diào)pH，否則會影響培養(yǎng)基的滲透壓。

　　3.6 配制好的培養(yǎng)基保存

　　滅菌以后培養(yǎng)基應(yīng)該迅速冷卻至所需溫度，避免長時(shí)間保存在滅菌鍋內(nèi)，造成過度滅菌，影響培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分或選擇性效果。所配制的培養(yǎng)基的量，應(yīng)該是在最長保存期限內(nèi)正好使用完。含染料的培養(yǎng)基應(yīng)閉光保存；倒好的瓊脂平板如果配制的當(dāng)天未使用完，應(yīng)于冷藏保存，如果保存時(shí)間超過2天，應(yīng)將其放入密封的塑料袋中保存。

　　4 培養(yǎng)基的性能測試

　　4.1 外觀控制

　　制備好的培養(yǎng)基應(yīng)有相應(yīng)的顏色，一般的培養(yǎng)基應(yīng)澄清、無渾濁、無沉淀。使用前應(yīng)檢查培養(yǎng)基的顏色是否發(fā)生變化，是否蒸發(fā)/脫水。

　　4.2 污染控制

　　從每批制備好的培養(yǎng)基中選取部分進(jìn)行污染測試（無菌試驗(yàn)），確定無微生物生長方可使用。

　　4.3 性能測試

　　4.3.1 測試菌株選擇測試菌株是具有其代表種的穩(wěn)定特性并能有效證明實(shí)驗(yàn)室特定培養(yǎng)基最佳性能的一套菌株，應(yīng)來自國際/國家標(biāo)準(zhǔn)菌種保藏中心ATCC標(biāo)準(zhǔn)菌株，菌株的選擇參考衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)WS/T232-2002《商業(yè)性微生物培養(yǎng)基質(zhì)量檢驗(yàn)規(guī)程》。

　　4.3.2 定量測試方法改良Miles-Misra法測試菌株過夜培養(yǎng)物10倍遞增稀釋；測試平板和參照平板劃分為4個(gè)區(qū)域并標(biāo)記；從最高稀釋度開始，分別滴一滴稀釋液于試驗(yàn)平板和對照平板標(biāo)記好的區(qū)域；將稀釋液涂滿整個(gè)1/4區(qū)域，37°C培養(yǎng)18小時(shí)；對易計(jì)數(shù)的區(qū)域計(jì)數(shù)，按公式計(jì)算生長率（生長率=待測培養(yǎng)基平板上得到的菌落總數(shù)/參考培養(yǎng)基平板上獲得的菌落總數(shù)）。非選擇性培養(yǎng)基上目標(biāo)菌的生長率應(yīng)不低于0.7，該類培養(yǎng)基應(yīng)易于目標(biāo)菌生長；選擇性培養(yǎng)基上目標(biāo)菌的生長率應(yīng)不低于0.1 。

　　4.3.3 半定量測試方法改進(jìn)的劃線法接種法平板分ABCD四區(qū)，共劃16條線，平行線大概相隔0.5cm，每條有菌落生長的劃線記作1分，每個(gè)僅一半的線有菌落生長記作0.5分，沒有菌落生長或生長量少于劃線的一半記作0分，分?jǐn)?shù)加起來得到生長指數(shù)G。目標(biāo)菌在培養(yǎng)基上應(yīng)呈現(xiàn)典型的生長，而非目標(biāo)菌的生長應(yīng)部分或完全被抑制，目標(biāo)菌的生長指數(shù)G大于6時(shí)，培養(yǎng)基可接受。

　　4.3.4 定性測試方法平板接種觀察法用接種環(huán)取測試菌培養(yǎng)物，在測試培養(yǎng)基表面劃平行直線。按標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的培養(yǎng)時(shí)間和溫度對接種后的平板進(jìn)行培養(yǎng)，目標(biāo)菌應(yīng)呈現(xiàn)良好生長，并有典型的菌落外觀、大小和形態(tài)，非目標(biāo)菌應(yīng)是微弱生長或無生長。

　　5 討論

　　培養(yǎng)基的質(zhì)量是微生物實(shí)驗(yàn)室檢測工作的基礎(chǔ)，事關(guān)檢測工作的準(zhǔn)確性、可靠性，在微生物實(shí)驗(yàn)室檢測工作中舉足輕重。如果在工作中忽視任何一個(gè)環(huán)節(jié)的質(zhì)量問題，都將導(dǎo)致檢驗(yàn)結(jié)果科學(xué)性、客觀性的偏離。因此，加強(qiáng)培養(yǎng)基的實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制，認(rèn)真地做好培養(yǎng)基的質(zhì)控工作，不斷完善和提高培養(yǎng)基的質(zhì)控水平，才能為微生物檢測實(shí)驗(yàn)室提供高質(zhì)量的培養(yǎng)基。

　　來源：食品實(shí)驗(yàn)室服務(wù)

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