摘 要： 研究日糧中添加活性乳酸菌微生態(tài)中藥發(fā)酵制劑-保禽肽對鵪鶉小腸發(fā)育， 腸道菌群及血清中膽固醇質(zhì)量濃度的影響。選用1日齡鵪鶉180羽， 隨機分成4組， 每組3 個重復(fù)， 每重復(fù)15羽。對照組飼喂基礎(chǔ)日糧， 試驗組在基礎(chǔ)日糧中分別按比例0.1%、0.2%、0.3%添加活性乳酸菌發(fā)酵制劑-保禽肽。結(jié)果顯示，保禽肽 對鵪鶉小腸發(fā)育影響不大（P>0.05） , 隨保禽肽添加量的增加， 小腸中大腸桿菌數(shù)顯著降低（P<0.05） ,乳酸菌數(shù)量顯著增加（P<0.05） 。日糧中添加0.2%和0.3%保禽肽可顯著降低血清中膽固醇質(zhì)量濃度（P<0.05） 。由此得出， 飼料中添加保禽肽可減少鵪鶉腸道內(nèi)大腸桿菌數(shù)量， 增加乳酸菌數(shù)量， 同時可降低血清膽固醇質(zhì)量濃度。
　　關(guān)鍵詞： 微生態(tài)、中藥、益生素、發(fā)酵、保禽肽、乳酸菌、小腸發(fā)育、大腸桿菌、血清膽固醇。
　　保禽肽是利用現(xiàn)代生物技術(shù)和先進設(shè)備利用工業(yè)規(guī)模生產(chǎn)的活性乳酸菌對精選中藥進行發(fā)酵，提高中藥功效4-28倍，并且改變了其適口性差的缺點?；钚匀樗峋l(fā)酵制劑-保禽肽具有功效全面、見效快（24小時）、貯藏時間長、使用方便等優(yōu)點 。活性乳酸菌是國際公認的可以飼用的有益菌種， 也是中國批準使用的有益菌品種， 是一種綠色環(huán)保無公害添加劑。目前， 有關(guān)研究報道主要集中于豬、肉雞、反芻動物方面，對于鵪鶉的作用尚未見報道。本試驗通過在日糧中添加活性乳酸菌發(fā)酵制劑來研究活性乳酸菌對鵪鶉小腸發(fā)育、腸道菌群及血清膽固醇質(zhì)量濃度的影響。
　　1   材料與方法
　　1. 1 試驗材料
　　飼用活性乳酸菌發(fā)酵制劑-保禽肽（ 活菌數(shù)≥10 億/g ） 由哈爾濱中科生物工程有限公司生產(chǎn)?；A(chǔ)日糧不含任何添加劑、聚糖類、益生素及抗生素， 分為0-2周齡和3-5 周齡2 個階段， 基礎(chǔ)日糧配方及營養(yǎng)成分見表1。
　　1. 2  試驗動物的選擇與分組
　　將180 羽1 日齡雛鵪鶉隨機分成4 組， 每組3 個重復(fù)， 每重復(fù)15 羽。對照組飼喂基礎(chǔ)日糧。試驗組分別在基礎(chǔ)日糧中添加0.1%、0.2%、0.3% 的保禽肽。
　　表1    基礎(chǔ)日糧配方及營養(yǎng)水平

　　注： 代謝能分別為12. 05 和11. 98 kJ/g。賴氨酸、蛋氨酸為計算值， 其余為實測值?；A(chǔ)日糧中微量元素添加為Mn 90 mg/kg、Zn 100mg/kg、Cu 7mg/ kg 、I0.3 mg/kg 、Fe 80 mg/kg.

　　1. 3  飼養(yǎng)管理

　　7 d育雛期在育雛箱中飼養(yǎng)， 7 d后采用籠飼養(yǎng)， 試驗期35 d。自由采食和飲水， 消毒程序按常規(guī)方法進行。自然光和日光燈結(jié)合， 試驗初期全天24 h 光照， 10 d 后逐漸減少日光燈光照時間，直至完全停止， 保持室內(nèi)溫度在33℃以上， 7 d后逐漸降低溫度至室溫。

　　1. 4 樣品采集與制備

　　1. 4. 1  血清采集 35 d 時從每個重復(fù)中隨機抽取已停止飼喂12 h以上的空腹鵪鶉4 羽， 稱量活體質(zhì)量， 用于計算腸指數(shù)。然后采用斷頸放血進行采血， 分別裝入離心管中， 3000 r/ min 離心10 min, 分離血清， 置-20℃冰箱中保存。

　　1. 4. 2  腸樣采集  將35 d屠宰后的鵪鶉每個重復(fù)隨機取4 羽， 總計48 羽進行解剖， 取其腸， 測量其空腸、回腸、十二指腸長度（mm） , 并計算腸指數(shù)。結(jié)扎盲腸口， 裝入樣品袋， 立即進行微生物培養(yǎng)計數(shù)。腸指數(shù)= 腸長度/體質(zhì)量。

　　1. 5   指標測定

　　1. 5. 1   微生物  麥康凱培養(yǎng)基、乳酸桿菌選擇性培養(yǎng)基購于北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司，用常規(guī)檢測法進行測定。采用麥康凱培養(yǎng)基37℃有氧培養(yǎng)24 h 進行大腸桿菌菌落計數(shù)； 采用乳酸桿菌選擇性培養(yǎng)基37℃厭氧培養(yǎng)48 h進行乳酸桿菌菌落計數(shù)。根據(jù)菌落形態(tài)、顏色和革蘭氏染色鏡檢結(jié)果進行鑒別， 用每克腸道內(nèi)容物中細菌個數(shù)的常用對數(shù)來表示。

　　1. 5. 2   血清膽固醇  取潔凈干燥試管5支， 編號， 依次加入標準膽固醇應(yīng)用液0、0.1、0.2、0.3、0.4 mL, 再依次加入醋酸液使各管體積均為0.4mL, 然后， 每管加入鄰苯二甲醛試劑0.2 mL, 蒸餾水0.01 mL, 混合酸4 mL, 混勻， 靜置10 min,于550 nm 波長處比色測定， 以總膽固醇質(zhì)量濃度為橫坐標， 光密度為縱坐標， 繪制標準曲線。

　　取3 支清潔干燥試管編號， 1 支為對照， 其余2 支為樣品， 分別加入稀釋的血清樣品0、0.4、0.4mL, 各加入鄰苯二甲醛0.2 mL, 混合酸4 mL, 另外在對照管中加入0. 4 mL 冰醋酸， 然后與標準曲線同時比色測定。其中量取0.1 mL 稀釋的未知血清樣品， 再用冰醋酸稀釋到4 mL 制成分析樣品?；靹?， 靜置10 min, 在550 nm 處比色， 從標準曲線查出樣品的膽固醇質(zhì)量濃度。

　　1. 6   數(shù)據(jù)處理

　　采用SPSS15.0 統(tǒng)計分析軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析， 采用單因素方差分析（One-Way ANO-VA），并進行Duncan?s 多重比較， 取P <0.05 作為差異顯著性的臨界值， 數(shù)據(jù)以“平均數(shù)± 標準誤”表示。

　　2   結(jié)果與分析

　　2. 1   鵪鶉腸長度及腸指數(shù)

　　從表2 可以看出， 0.3%保禽肽組鵪鶉空腸長度顯著高于0.1%保禽肽（ P<0.05） ; 但各水平保禽肽組鵪鶉空腸長度與對照組相比差異不顯著（P>0.05） ?；钚愿山湍笇g鶉回腸、十二指腸長度沒有顯著影響（P>0.05） 。小腸長度隨添加量的增加總體有增長的趨勢， 但未達到統(tǒng)計學(xué)顯著水平（P>0.05） 。日糧添加保禽肽對空回比沒有顯著影響（P>0.05） 。0.2%保禽肽組鵪鶉空腸指數(shù)顯著高于0.1%保禽肽組（P< 0.05） ; 但各水平保禽肽組鵪鶉空腸指數(shù)與對照組相比差異不顯著（P>0.05） 。保禽肽對鵪鶉回腸、十二指腸、小腸腸指數(shù)沒有顯著影響（ P>0.05） 。

　　表2    保禽肽對鵪鶉空腸、回腸、十二指腸、小腸長度及腸指數(shù)的影響

　　

項目	保禽肽添加量(%)
	0(CK)	0.1	0.2	0.3
空腸長度/ cm	26.0±3.60ab	24.92±2.78b	27.98±3.25a	25.65±3.13a
回腸長度/ cm	25.19±3.68	26.13±3.70	25.48±3.42	26.85±5.07
十二指腸長度/ cm	12.42±1.27	12.77±1.63	12.57±1.00	12.67±1.30
空回比	1.05±0.19	0.97±0.19	1.11±0.12	0.98±0.17
小腸長度/ cm	63.64±5.70	63.8±4.922	66.39±6.19	65.07±6.21
空腸指數(shù)	1.41±0.18ab	1.25±0.11b	1.45±0.15a	1.31±0.09ab
回腸指數(shù)	1.36±0.08	1.32±0.12	1.32±0.17	1.37±0.09
十二指腸指數(shù)	0.67±0.13	0.64±0.09	0.65±0.08	0.65±0.10
小腸指數(shù)	3.44±1.24	3.21±1.32	3.44±1.10	3.32±1.21

　　注： 同行數(shù)據(jù)后不同小寫字母表示差異顯著（ P< 0. 05） 。

　　2. 2   鵪鶉腸道菌群含量

　　從表3 可看出， 保禽肽對鵪鶉腸道內(nèi)大腸桿菌的菌群有較強抑制作用， 試驗組鵪鶉腸道內(nèi)大腸桿菌顯著低于對照組（P<0.05） ,而且隨添加量增加，作用增強，0.2%和0.3%保禽肽組鵪鶉腸道內(nèi)大腸桿菌顯著低于0.1%保禽肽組（P<0.05） 。日糧添加保禽肽對鵪鶉腸道內(nèi)乳酸菌有促進作用， 試驗組鵪鶉腸道內(nèi)乳酸菌顯著高于對照組（P<0.05） , 而且隨添加量增加， 作用增強，0.2%和0.3%保禽肽組鵪鶉腸道內(nèi)乳酸菌顯著高于0.1%活性酵母組（P<0.05） 。

　　表3   保禽肽對鵪鶉腸道內(nèi)大腸桿菌、乳酸菌及血清膽固醇質(zhì)量濃度的影響

　　注： 同行數(shù)據(jù)后不同小寫字母表示差異顯著（ P< 0. 05） 。

　　2. 3   鵪鶉血清膽固醇質(zhì)量濃度

　　從表3 可以看出， 隨日糧活性保禽肽添加量的增加鵪鶉血清中膽固醇質(zhì)量濃度減少， 且0.2%和0.3%保禽肽組血清膽固醇質(zhì)量濃度顯著低于對照組和0.1%保禽肽組（P<0.05） 。

　　3   結(jié)論與討論

　　3. 1   保禽肽對鵪鶉小腸發(fā)育的影響

　　小腸作為動物體吸收營養(yǎng)物質(zhì)的主要場所，其長度直接影響營養(yǎng)物質(zhì)吸收， 各種營養(yǎng)物質(zhì)在小腸內(nèi)吸收的部位不盡相同， 如糖類、蛋白質(zhì)和脂肪的消化產(chǎn)物大部分是在十二指腸和空腸吸收；鐵、鎂、鈣在小腸上段吸收； 而維生素、膽鹽則在回腸被吸收。各段腸指數(shù)也側(cè)面反映了各段腸道的發(fā)育狀況。本試驗研究表明， 保禽肽對鵪鶉小腸不同段（ 空腸、回腸、十二指腸） 的生長發(fā)育雖然有一定的促進作用， 但影響程度不盡一致， 保禽肽對空腸發(fā)育影響最大，0.2%保禽肽組鵪鶉空腸長度、空腸指數(shù)顯著高于0.1%保禽肽組。說明隨保禽肽量的增加對空腸發(fā)育的刺激作用較其他小腸段強。盡管隨日糧保禽肽添加量的增加對各組間鵪鶉空腸長度、空腸指數(shù)有顯著影響， 但日糧添加保禽肽組與對照組相比， 差異不顯著， 而且日糧添加保禽肽對鵪鶉回腸、十二指腸及整個小腸的長度、腸指數(shù)未達到顯著差異水平。各組間空回比也未達到顯著差異水平。由于腸道長度增長可增加食物在腸道內(nèi)的吸收面積， 利于食物在腸道內(nèi)的消化吸收， 從而促進動物生長。這說明保禽肽促進禽類生長，提高禽類生長性能的原因是由于保禽肽改善了腸道環(huán)境， 因為從本試驗來看保禽肽對促進腸道發(fā)育影響不大。

　　3. 2   活性干酵母對鵪鶉腸道內(nèi)菌群的影響

　　小腸不僅是營養(yǎng)物質(zhì)吸收和消化的主要場所， 也與腸道內(nèi)菌群的平衡與宿主的生產(chǎn)性能有重要關(guān)系。日糧添加保禽肽，鵪鶉腸道內(nèi)大腸桿菌數(shù)量明顯減少， 而乳酸桿菌數(shù)量顯著增加， 保禽肽組與對照組相比，保禽肽組在降低大腸桿菌和提高乳酸菌數(shù)量方面效果很明顯。這說明保禽肽對腸道微生態(tài)具有調(diào)節(jié)作用。乳酸菌屬于厭氧菌， 在無氧條件能繁殖，在消化道內(nèi)大量繁殖，并大量產(chǎn)酸，從而抑制了大腸桿菌、沙門氏菌等有害菌群的生長繁殖， 促進雙歧桿菌、乳酸菌等有益菌的繁殖。適量添加保禽肽可以改善胃腸環(huán)境和菌群結(jié)構(gòu)， 促進整個腸道乳酸菌、芽孢桿菌、雙歧桿菌等有益菌的繁殖， 提高其數(shù)量及活力， 從而促進動物對營養(yǎng)物質(zhì)的消化、吸收和利用 。

　　3. 3   保禽肽對鵪鶉血清膽固醇質(zhì)量濃度的影響

　　本試驗采用保禽肽飼喂鵪鶉可降低血清中膽固醇的質(zhì)量濃度。這可能是由于添加保禽肽提高了腸道內(nèi)乳酸菌的數(shù)量。膽固醇可經(jīng)肝臟催化形成膽酸， 再同甘氨酸或?；撬峤Y(jié)合形成可溶于水的脫氧甘膽酸鹽或牛磺膽酸鹽等膽汁鹽， 通過糞便排出體外。腸內(nèi)一些乳酸菌等微生物產(chǎn)生的膽汁鹽水解酶催化膽汁鹽產(chǎn)生脫甘氨酸或脫?；撬岬牟蝗苡谒娜ソY(jié)合型膽汁鹽， 這種膽汁鹽可同血清中膽固醇發(fā)生共沉淀作用排出體外。除此之外， 飼喂保禽肽降低鵪鶉血清中膽固醇質(zhì)量濃度的另一個原因可能是保禽肽含有β-葡聚糖， β-葡聚糖妨礙膳食膽固醇的吸收， 抑制膽酸鹽的再吸收， 增加膽固醇的排出量從而降低了血漿膽固醇的質(zhì)量濃度。