| 摘 要: 牛分支桿菌感染的主要特征是引起細(xì)胞免疫反應(yīng)?，F(xiàn)在牛結(jié)核病的診斷試驗(yàn)是以T細(xì)胞反應(yīng)機(jī)制為基礎(chǔ)的。低敏感性的結(jié)核血清學(xué)試驗(yàn)是不值得提倡的，血清學(xué)試驗(yàn)最好作為細(xì)胞學(xué)試驗(yàn)的補(bǔ)充而不是替代。最近，發(fā)現(xiàn)了牛結(jié)核γ干擾素試驗(yàn)是一種快速的（24 h）惟一使用全血的體外試驗(yàn)，該方法在澳大利亞應(yīng)用，結(jié)果表明，比傳統(tǒng)的結(jié)核菌素法診斷牛結(jié)核更敏感。假陽(yáng)性反應(yīng)的難題歸因于所使用的抗原制品間的交叉反應(yīng)特性，設(shè)動(dòng)物對(duì)牛PPD和禽PPD的γ干擾素反應(yīng)作對(duì)照可解決假陽(yáng)性的問(wèn)題。雖然牛結(jié)核特異性蛋白已確認(rèn)并被分類，這些特異性蛋白可能在血清學(xué)或細(xì)胞學(xué)診斷試驗(yàn)中使用，但是它們可能因牛對(duì)牛分支桿菌感染的免疫反應(yīng)的遺傳多樣性而受到限制。? 關(guān)鍵詞： 牛分支桿菌;酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn);γ干擾素;單一結(jié)核菌素試驗(yàn)? 結(jié)核菌素試驗(yàn)是廣泛使用的最古老的免疫學(xué)試驗(yàn)方法之一。自從羅伯特·庫(kù)克首次在1891年提出了結(jié)核菌素反應(yīng)，這種試驗(yàn)一直應(yīng)用于動(dòng)物和人結(jié)核病的免疫診斷。盡管傳統(tǒng)的結(jié)核菌素試驗(yàn)得到了廣泛的應(yīng)用，但已證實(shí)該方法存在的問(wèn)題。一些詳細(xì)研究牛單一結(jié)核菌素試驗(yàn)（SIDT）的敏感性和特異性的文獻(xiàn)指出，在某種情況下，這種試驗(yàn)方法的敏感性會(huì)大大下降。 Francis J等(1978)重復(fù)了該項(xiàng)工作，結(jié)果發(fā)現(xiàn)SIDT的敏感性只是中等水平（平均72%）。Wood P R等發(fā)現(xiàn)SIDT的敏感性為65.6%。?? 雖然SIDT的特異性一般很高（98.8%），但在一些國(guó)家的一些畜群和一些特殊群體中，可因抗原與非典型結(jié)核分支桿菌間的交叉反應(yīng)而出現(xiàn)假陽(yáng)性。另外,該試驗(yàn)結(jié)果需要3 d，并且被檢牛在60 d~90 d內(nèi)不能再接受檢查。因此,亟待探索診斷結(jié)核病的替代試驗(yàn)。? 1 血清學(xué)檢查? 對(duì)牛結(jié)核病的早期血清學(xué)研究有各種不同的試驗(yàn)，如皂土絮狀沉淀試驗(yàn)、kaolin凝集試驗(yàn)、直接熒光抗體試驗(yàn)和補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)。所有這些試驗(yàn)系統(tǒng)都使用粗制抗原制品，且非感染牛和其他分支桿菌感染的動(dòng)物與該血清具有廣泛的交叉反應(yīng)，與較低的特異性問(wèn)題一樣，這些血清學(xué)試驗(yàn)也有很低的敏感性，而那些結(jié)核病牛的檢測(cè)結(jié)果卻是陰性。從這些早期研究中得到的惟一可喜的成果是在提高抗體效價(jià)和感染的嚴(yán)重程度之間存在相關(guān)性，也發(fā)現(xiàn)牛結(jié)核菌素試驗(yàn)陽(yáng)性者中抗體反應(yīng)有所提高。? Thoen C A等首次報(bào)道了用結(jié)核純化蛋白提取物作抗原來(lái)進(jìn)行牛結(jié)核病的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA），在ELISA的早期研究中,Ritacco V等報(bào)道了其對(duì)牛結(jié)核病的敏感性為90%，特異性為89.8%但是后來(lái)該研究組成員對(duì)ELISA進(jìn)行了更深入的研究，發(fā)現(xiàn)ELISA的敏感性下降至73.6%。Plackett等報(bào)道，曾對(duì)感染牛分支桿菌但對(duì)牛結(jié)核菌素試驗(yàn)沒(méi)有反應(yīng)的動(dòng)物進(jìn)行了ELISA試驗(yàn)檢測(cè)。但因抗體試驗(yàn)的低敏感性，他們提議將ELISA作為結(jié)核菌素試驗(yàn)的補(bǔ)充試驗(yàn)。據(jù)報(bào)道，經(jīng)超聲處理的牛分支桿菌樣品用ELISA檢測(cè)發(fā)現(xiàn)其特異性很差，這可能是因?yàn)闃悠分械膹V泛交叉反應(yīng)熱激蛋白的濃度要比培養(yǎng)濾液蛋白高的緣故。從結(jié)核病的早期血清學(xué)試驗(yàn)認(rèn)識(shí)到，因分支桿菌間有廣泛抗原交叉反應(yīng)，故特異性抗原在發(fā)生特異性抗體反應(yīng)中是必要的。因牛分支桿菌的主要抗原已經(jīng)分離到且序列已測(cè)出，現(xiàn)在很容易解釋分支桿菌的早期血清學(xué)研究中的交叉反應(yīng)性高的原因。除了已知的非蛋白抗原間的交叉反應(yīng)外，還知道結(jié)核分支桿菌的許多主要蛋白抗原與分支桿菌屬有同源性，且與很多其他菌類有同源性。Fifis等報(bào)道，一種較大的牛分支桿菌特異性蛋白（MPT70）的使用大大提高了ELISA檢測(cè)牛結(jié)核病的特異性。盡管在Harboe M等的研究中MPT70的敏感性低,但他們還是支持其抗體效價(jià)和遲發(fā)性超敏反應(yīng)之間是負(fù)相關(guān)性。? 在用牛分支桿菌的實(shí)驗(yàn)性感染過(guò)程中，雖然不同動(dòng)物間反映出感染動(dòng)物的數(shù)量非常不同，但發(fā)現(xiàn)在第19周至第28周間MPT70的抗體反應(yīng)很低，然后逐漸增加。牛分支桿菌感染牛的結(jié)核菌素試驗(yàn)結(jié)果表明，可以誘導(dǎo)對(duì)MPT70的很強(qiáng)的免疫記憶抗體反應(yīng)。幾種研究表明，這種免疫記憶影響著后來(lái)的結(jié)核菌素試驗(yàn)，在這些研究中選用了一些結(jié)核菌素試驗(yàn)陽(yáng)性的感染牛作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。? 為了研究MPT70-ELISA的敏感性和特異性，使用了一批經(jīng)過(guò)選擇的血清樣，牛分支桿菌培養(yǎng)陽(yáng)性牛109例，培養(yǎng)陰性牛229例，這229頭陰性牛中4頭在ELISA檢測(cè)中呈陽(yáng)性，該檢測(cè)結(jié)果的特異性為98.2%；109頭培養(yǎng)陽(yáng)性牛中有54頭是ELISA檢測(cè)陽(yáng)性，故MPT70的ELISA的敏感性為49.5%。但是該次所有使用的血清的敏感性低，是因?yàn)檫@些牛最近剛接受了結(jié)核菌素試驗(yàn)。在結(jié)核菌素試驗(yàn)前采集的血清是可以應(yīng)用的。對(duì)32例牛分支桿菌感染牛進(jìn)行MPT70-ELISA試驗(yàn)，僅有4例陽(yáng)性，即結(jié)果是12.5%的低敏感性。這又一次證實(shí)了牛分支桿菌感染牛對(duì)結(jié)核菌素有較強(qiáng)的免疫記憶反應(yīng)。MPT70-ELISA也在該情況下被用于檢測(cè)，從牛分支桿菌感染的牛群中抽出1 362頭，所有血樣都在結(jié)核菌素試驗(yàn)前采集，這次實(shí)驗(yàn)得出MPT70-ELISA的敏感性是18.1%，特異性為96.4%，這么低的敏感性，可能MPT70-ELISA反應(yīng)的假陽(yáng)性率與交叉反應(yīng)的水平相關(guān)。? 1.1 抗原檢測(cè)? 抗體已被用于人的痰液，尿液和腦脊液中的分支桿菌抗原的檢測(cè)。但是對(duì)獸醫(yī)來(lái)說(shuō)，使用這些樣品是不太適用的。單克隆抗體已經(jīng)被用于牛分支桿菌培養(yǎng)物的陽(yáng)性鑒定。以每毫升105 cfu的菌體濃度與ELISA相結(jié)合直接檢測(cè)牛分支桿菌。惟一從牛分離出的用于體外檢測(cè)牛結(jié)核的可實(shí)用的診斷樣品就是痰液，此階段的細(xì)菌水平最可能在該病發(fā)展到一定階段時(shí)才能檢測(cè)到。 1.2限 分支桿菌的免疫反應(yīng)圖譜? 人的主要分支桿菌病，即麻風(fēng)病和結(jié)核病，通常很容易產(chǎn)生與因分支桿菌的生長(zhǎng)所導(dǎo)致的免疫系統(tǒng)免疫失敗相關(guān)的高水平的循環(huán)抗體。Thorns和Morris在幾種動(dòng)物身上重復(fù)了牛分支桿菌感染的過(guò)程，且包括長(zhǎng)期感染的病灶，結(jié)果發(fā)現(xiàn)牛和人一樣，大多數(shù)個(gè)體能產(chǎn)生有效的T細(xì)胞反應(yīng)，在一些動(dòng)物如鼯和獾，更頻繁的發(fā)生突發(fā)的疾病，因此，發(fā)現(xiàn)在種內(nèi)和種間存在一種相互關(guān)系，即T細(xì)胞反應(yīng)性和感染部位間的關(guān)系；另一方面是抗體水平和疾病發(fā)展程度間的關(guān)系。牛結(jié)核病的血清學(xué)研究支持這個(gè)說(shuō)法。細(xì)胞學(xué)試驗(yàn)如結(jié)核菌素、淋巴細(xì)胞增生試驗(yàn)和γ干擾素試驗(yàn)都比診斷牛結(jié)核病血清學(xué)試驗(yàn)更簡(jiǎn)單。從牛結(jié)核病的各種血清學(xué)的研究中得出的主要結(jié)論與從人結(jié)核病和麻風(fēng)病患者的相似研究中得出的結(jié)論是一致的。動(dòng)物對(duì)分支桿菌感染的較差的反應(yīng)主要受血清學(xué)試驗(yàn)敏感性的局限，而且分支桿菌抗原間的交叉反應(yīng)性也導(dǎo)致了高水平的假陽(yáng)性反應(yīng)。因?yàn)橹挥懈腥緜€(gè)體的一個(gè)小片段有被這些單克隆抗體識(shí)別的抗原表位，故種屬特異性單克隆抗體已經(jīng)用于競(jìng)爭(zhēng)ELISA（能產(chǎn)生一種特異抗體的試驗(yàn)）中。迄今也沒(méi)有診斷結(jié)核病的血清學(xué)試驗(yàn)被醫(yī)學(xué)和獸醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室用于常規(guī)方法。
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畜牧人
畜牧人養(yǎng)豬
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